Overexpression della laminina-5 (LN-5) nel lavaggio peritoneale
di pazienti con carcinomi del grosso intestino. Risultati preliminari
Volpi A., D'Elia G., Pannarale O.C., Di Gennaro F., Guida P., Martinelli E., Kavvadias A., Balducci G., Ialongo P., Panebianco A., De Luca M., Fabiano G., Palasciano N.
Versione Italiana:
Studi recenti evidenziano che l’interazione fra LN-5 (proteina formata da 3 catene a3/b3/g2) e cellule neoplastiche è importante nella invasione tumorale, anche nel cancro colo-rettale. La disseminazione peritoneale, che sembra originare dalle FPTCs (Free Peritoneal Cancer Cells), peggiora la prognosi di questi pazienti, anche dopo chirurgia radicale. Pertanto, per rilevare FPTCs, sono state utilizzate varie tecniche (immunoistochimica, PCR). La RT-PCR ha permesso di valutare la presenza di marker tumore–associati nel lavaggio peritoneale (utilizzando primer specifici per CEA, cK-20). Attualmente la citologia del liquido peritoneale ha bassa sensibilità. L’obiettivo del nostro studio è di studiare l’espressione della LN-5 nel lavaggio peritoneale pre/post-operatorio di pazienti con carcinoma colorettale e di pazienti sani con RT-PCR semiquantitativa, valutandone l’intensità all’elettroforesi: alta intensità indica overexpression. I lavaggi pre/post-operatori di 30 pazienti con cancro colorettale (13M/17F) di età mediana 69 (58-84) e di 10 pazienti sani sono stati analizzati mediante citologia sec. Papanicolau e RT-PCR.Nessun paziente sano ha mostrato citologia positiva od overexpression di LN-5. L’overexpression di LN-5 è stata riscontrata nel 56,6% nel pre e nel 76,6% nel post-operatorio, con maggior frequenza del gene LAMC2. Ciò evidenzia una relazione tra FPTCs e LN-5, e quest’ultima potrebbe essere usata come marker nella individuazione di pazienti a maggior rischio di recidiva. Unico dato statisticamente significativo è la correlazione tra LAMB3 nel lavaggio postoperatorio e mortalità (p=0.026). Tuttavia, l’ accuratezza diagnostica dovrebbe essere ricercata associando RT-PCR quantitativa con Western-blot e dosaggio sierico di LN-5. Inoltre, per validare questi dati, è necessario analizzare un maggior numero di pazienti ed i loro follow-up.
English version:
Recent studies show that interaction between LN (heterotrimeric protein formed by a3/b3/g2 chains) and cancer cells plays an important role in tumor invasion, also in colorectal cancer. The overall survival was significantly worse in patients with free peritoneal cancer cells(FPTCs): detection of FPTCs after curative surgery is a challenge, because could improve staging and prognosis. Peritoneal citology is the current standard procedure with very low sensivity. We aimed to study the expression of LN5 in the peritoneal lavage of colorectal cancer pts and in controls with semiquantitative reverse trancriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). LN-5 overexpression was evaluated observing PCR- products intensity at electrophoresis: high intensity is correlated to overexpression. Pre and post-operative peritoneal lavages of 30 pts with colorectal cancer (13M;17F), with median age of 69 (58-84), and of 10 controls, were analyzed by conventional cytology and a semiquantitative RT-PCR. No cancer pts showed pre/postoperative negative cytology and did not express LN-5. In cancer pts. cytology was positive in 2 pts in pre/postoperative lavage. LN-5 overexpression was observed in 56,6% preoperatively and in 76,6% postoperatively. LN-5 g 2 chain was most frequent chain.
Our study suggests a relationship between LN-5 and FPTCs, as shown by the low expression of lamimine in controls. LN-5 could be a useful marker to identify a subgroup of early-stage patients at increased risk of recurrence; moreover, mortality seems to correlated to LAMB3 chain. The diagnostic accuracy could be improved by using a quantitative RT-PCR or western-blot and detecting serum laminine. Finally, to validate these findings a larger number of pts with follow-up study is required.
